Post by alamin999 on Aug 2, 2023 1:11:32 GMT -5
病毒感染 Tial1 (NM_00009383) 的小鼠 Myc-DKK 标记 cDNA 由 Origene 提供，并使用限制位点 KpnI 和 PmeI (Ad-Tial1) 克隆到 pVQAd CMV K-NpA (Viraquest) 中。所有病毒都从与转基因不同的腺病毒位点表达 GFP。Ad-GFP 对照基于相同的载体主链（包括 GFP）。细胞用图中和图例中所示的 MOI 感染 6 小时，然后维持培养直至指定的时间点。通过单次尾静脉注射3×10 9噬菌斑
形成单位（最终体积为0.2ml，稀释于PBS中）来进行小鼠亚洲手机号码列表的腺病毒感染。 小鼠原代肝细胞分离 通过胶原酶灌注从 8 周龄雄性小鼠中分离原代肝细胞，如参考文献中先前所述。38，稍加修改。通过腹膜内注射戊巴比妥（Esconarkon US vet）麻醉小鼠。通过下腔静脉插管并以肝门静脉作为引流管对肝脏进行灌注。用预热的含有0.5 mM EGTA的
汉克平衡盐溶液（HBSS，Life Technologies）灌注肝脏，然培养基（DMEM 1 g/l葡萄糖（Life Technologies），1%青霉素-链霉素（Life Technologies），15 mM HEPES（Life Technologies），30 μg ml -1Liberase 研究级培养基嗜热菌蛋白酶浓度 (Roche))，每次五分钟，流速为 5 毫升/分钟。通过手术切除肝脏，通过摇动将肝细胞释放到 10 ml 消化培养基中，并补充 15 ml 冰冷的低葡萄糖